Hướng dẫn thử nghiệm cho bộ dụng cụ ELISA Glutathione Reductase (GSR) ở chuột

BS-3507 Bộ dụng cụ ELISA cho chuột Glutathione Reductase (GSR)

I. Nguyên tắc thí nghiệm

Bộ dụng cụ này sử dụng phương pháp hấp thụ miễn dịch liên kết enzyme sandwich lưỡng kháng thể (ELISA) để phát hiện hoạt động của glutathione reductase (GSR) ở chuột. Các gói kháng thể GSR kháng chuột được đưa vào một tấm micropore và sau khi thêm mẫu được thử nghiệm, GSR trong mẫu liên kết với kháng thể gói. Sau đó, các kháng thể xét nghiệm được đánh dấu bằng biotin được thêm vào để tạo thành phức hợp "kháng thể kháng nguyên enzyme". Sau khi bổ sung streptomycin (SABC) được đánh dấu bởi horseradish peroxidase (HRP), độ hấp thụ (giá trị OD) được xác định ở bước sóng 450nm bằng cách tạo màu cơ chất TMB, và giá trị OD tương quan tích cực với nồng độ GSR trong mẫu.

II. Thành phần bộ dụng cụ

Thành phần 48 Cấu hình lỗ 96 Cấu hình lỗ Điều kiện bảo quản

Gói trước Tấm Enzyme 8 × 6 dải 8 × 12 dải 2-8 ℃

Sản phẩm tiêu chuẩn (đông khô) 1 cái 1 cái 2-8 ℃

Chất lỏng pha loãng tiêu chuẩn/mẫu 10mL 15mL 2-8 ℃

Kháng thể phát hiện Biotin hóa 60 μL (100 ×) 120 μL (100 ×) - 20 ℃

Dung dịch pha loãng kháng thể sinh học 6mL 12mL 2-8oC

Hợp chất SABC 6mL 12mL 2-8oC

Chất lỏng kết xuất màu TMB (A/B) 3mL mỗi 6mL mỗi 2-8oC

Chấm dứt 6mL 12mL 2-8oC

20 × Chất tẩy rửa cô đặc 30mL 60mL Nhiệt độ phòng

Niêm phong tấm phim 2 miếng 4 miếng Nhiệt độ phòng

Hướng dẫn 1 x 1 x -

III. Xử lý mẫu

Mẫu huyết thanh/plasma:

Để nhiệt độ phòng toàn máu 2 giờ hoặc 4 độ C qua đêm, 1000 g ly tâm 20 phút, lấy sạch.

Tránh tan máu hoặc các mẫu lipid cao, 2-8 ℃ có thể được bảo quản trong 48 giờ; Bảo quản lâu dài cần -20 ℃ hoặc -80 ℃, tránh đóng băng và tan chảy nhiều lần.

Mẫu mô/tế bào:

Sau khi mô homogenization hoặc tế bào lysis, ly tâm được làm sạch và nồng độ protein được điều chỉnh đến phạm vi khuyến nghị.

IV. Các bước thử nghiệm

Công thức giặt:

Pha loãng 20 × nước rửa đậm đặc 20 lần với nước cất (ví dụ: 1mL nước cô đặc+19mL nước cất).

Tiêu chuẩn pha loãng:

Lấy 7 ống ly tâm, đánh dấu 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64, trống (Blank).

Mỗi ống thêm dung dịch pha loãng tiêu chuẩn/mẫu 200 μL, ống đầu tiên thêm dung dịch gốc tiêu chuẩn 200 μL, pha loãng từng giai đoạn sau khi trộn đều.

Thêm mẫu và ấp trứng:

Tiêu chuẩn 100 μL hoặc mẫu được thêm vào mỗi lỗ, ủ ở 37 ° C trong 90 phút.

Loại bỏ chất lỏng và rửa 3 lần (mỗi lần ngâm 1-2 phút).

Phản ứng kháng thể enzyme:

100 μL kháng thể thử nghiệm biotin được thêm vào mỗi lỗ (pha loãng theo 1: 100), ủ ở 37 ° C trong 60 phút.

Rửa 3 lần.

Phản ứng phức hợp SABC:

100 μL SABC phức tạp được thêm vào mỗi lỗ và ủ ở 37 ° C trong 30 phút.

Rửa 3 lần.

Kết xuất và kết thúc:

Mỗi lỗ được thêm 90 μL TMB Color Rendering Liquid (A/B Liquid Equal Mix) và ủ ở 37 độ C trong 15 phút.

Mỗi lỗ thêm 50 ml chất kết thúc, trộn đều rồi lập tức xác định.

V. Tính toán kết quả

Với nồng độ hàng tiêu chuẩn là tọa độ ngang (X) và giá trị ODL là tọa độ dọc (Y), vẽ đường cong tiêu chuẩn.

Nồng độ GSR được tính toán bằng cách thay thế các giá trị ODD mẫu bằng phương trình đường cong tiêu chuẩn.

VI. Chú ý

Bảo quản thuốc thử:

Các sản phẩm tiêu chuẩn, kháng thể biotin hóa cần được bảo quản ở -20 ℃, tránh đông lạnh lặp đi lặp lại; Các thành phần khác được bảo quản ở 2 - 8 độ C.

Xử lý mẫu:

Tránh sử dụng các mẫu tan máu, lipid cao hoặc đục; Mẫu mô cần cân bằng đầy đủ.

Thông số kỹ thuật hoạt động:

Di dịch cần chính xác, tránh ô nhiễm chéo; Nhu cầu giặt, chất lỏng còn lại ảnh hưởng đến kết quả.

Hiệu chuẩn dụng cụ:

Bước sóng của máy tiêu chuẩn enzyme cần được hiệu chuẩn đến 450 nm, lỗ trống được điều chỉnh bằng 0.

Bảo vệ an toàn:

Terminal chứa axit sulfuric và đeo găng tay và kính bảo hộ khi vận hành.

VII. Kết quả mong muốn

Độ nhạy: GSR thấp tới 0,156ng/mL có thể được phát hiện.

Phạm vi tuyến tính: 0,156-10ng/mL.

VIII. Phạm vi ứng dụng

Bộ dụng cụ này thích hợp cho việc kiểm tra định lượng GSR trong huyết thanh chuột, huyết tương, mô homogenization và nuôi cấy tế bào, cho mục đích nghiên cứu khoa học.

Mẹo: Thao tác cụ thể vui lòng lấy hướng dẫn sử dụng bộ dụng cụ thực tế làm chuẩn, trước khi thử nghiệm cần đọc hướng dẫn đầy đủ và xác nhận tính toàn vẹn của thành phần.

Lưu ý: Trên đây chỉ để tham khảo, thuốc thử này chỉ dành cho nghiên cứu khoa học, không phải là dữ liệu thực tế, các thí nghiệm cần tuân thủ nghiêm ngặt các hướng dẫn hoặc tư vấn cho giáo viên kỹ thuật.