Hướng dẫn sử dụng bộ xét nghiệm Soyanoside chuột (Daidzein) ELISA

BS-8567 Bộ dụng cụ ELISA cho chuột Soyanoside (Daidzein)

Tổng quan sản phẩm

Bộ dụng cụ này sử dụng phương pháp hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme cạnh tranh (ELISA) đặc biệt để kiểm tra định lượng hàm lượng daidzein (Daidzein) trong các mẫu sinh học như huyết tương, huyết thanh hoặc mô homogenization của chuột. Soyanoside là một isoflavone tự nhiên có hoạt tính sinh học như chống oxy hóa, chống viêm và điều hòa miễn dịch, được tìm thấy rộng rãi trong các cây họ đậu và việc kiểm tra nội dung của chúng là rất quan trọng đối với nghiên cứu dược lý và đánh giá dinh dưỡng. Bộ dụng cụ này dựa trên nguyên tắc liên kết kháng nguyên-kháng thể cụ thể, cho phép phát hiện độ nhạy cao bằng cách khuếch đại tín hiệu enzyme, phù hợp cho phân tích thông thường trong phòng thí nghiệm.

Thành phần Kit

Pre-packed được microporous tấm: 96 lỗ (12 dải × 8 lỗ), các thanh có thể tháo rời, bọc bằng kháng thể đặc hiệu của các nguyên tử đậu nành.

Sản phẩm tiêu chuẩn: 6 gradient nồng độ (0,13-61,02 ng/mL), bột đông khô, hòa tan lại với dung dịch pha loãng tiêu chuẩn trước khi sử dụng.

Enzyme marker: Kháng nguyên cạnh tranh được đánh dấu bởi horseradish peroxidase (HRP), bảo quản khỏi ánh sáng màu nâu.

Chất nền kết xuất màu: dung dịch TMB, chất lỏng trong suốt không màu.

Chấm dứt dung dịch: dung dịch axit sulfuric 2M để chấm dứt phản ứng.

Dung dịch rửa: 20 × dung dịch đệm đậm đặc, cần pha loãng với nước khử ion để sử dụng.

Pha loãng mẫu: được sử dụng để điều chỉnh nồng độ mẫu đến phạm vi phát hiện.

Niêm phong tấm phim: 2 tờ cho tấm micropore niêm phong.

Hướng dẫn sử dụng: 1 bản.

Điều kiện bảo quản

Bộ dụng cụ chưa mở: Bảo quản tránh ánh sáng 2-8 ° C, có hiệu lực trong 12 tháng.

Sau khi mở nắp: các sản phẩm tiêu chuẩn, các chất đánh dấu enzyme và các chất nền kết xuất màu cần được đóng băng riêng (-20 ° C) để tránh đóng băng và tan chảy lặp đi lặp lại; Tấm micropore khô và niêm phong bảo quản.

Cấm đóng băng chất tẩy rửa cô đặc, ngăn ngừa kết tinh.

Xử lý mẫu

Mẫu huyết tương/huyết thanh: Ly tâm ngay sau khi thu thập (3000 vòng/phút, 10 phút), lấy chất lỏng sạch, -80 ° C để bảo quản. Tránh tan máu.

Cân bằng mô: cân bằng mô, thêm nước muối sinh lý (1: 9 w/v) cân bằng, ly tâm lấy nước sạch.

Thận trọng: Soyanoside trong mẫu có thể tồn tại ở trạng thái liên kết, nên thủy phân beta-glucuronidase để tăng độ nhạy phát hiện. Cần ly tâm (5.000 vòng/phút, 10 phút) hoặc lọc (màng 0,22 μm) khi mẫu bị đục.

Các bước thử nghiệm

1. Chuẩn bị thuốc thử

Dung dịch rửa: Pha loãng 20 × cô đặc đến 1 × với nước khử ion (ví dụ: 10 mL cô đặc+190 mL nước).

Gradient tiêu chuẩn: Pha loãng lại sản phẩm tiêu chuẩn đông khô bằng dung dịch pha loãng sản phẩm tiêu chuẩn, gradient pha loãng đến 0,13, 0,39, 1,17, 3,51, 10,53, 61,02 ng/mL.

Pha loãng mẫu: Pha loãng mẫu cần kiểm tra trong phạm vi phát hiện bằng dung dịch pha loãng mẫu (nên xác định bội số pha loãng trước khi thử nghiệm).

2. Thêm mẫu và ủ

Mỗi lỗ thêm 100 μL tiêu chuẩn hoặc mẫu (đặt lỗ trống chỉ thêm mẫu pha loãng).

Mỗi lỗ được thêm vào các dấu hiệu enzyme 50μL, lắc nhẹ và trộn đều.

Ủ tránh ánh sáng ở 37 ° C trong 60 phút.

3. Rửa

Bỏ đi chất lỏng bên trong lỗ, mỗi lỗ thêm vào 350 ml chất tẩy rửa, để yên 30 giây rồi quăng khô, lặp lại 5 lần, vỗ khô.

4. Kết xuất màu và kết thúc

100 μL chất nền màu được thêm vào mỗi lỗ và ủ ở 37 ° C trong 15 phút.

Mỗi lỗ được thêm 100 μL terminator, lắc nhẹ và trộn đều.

5. Xác định

Độ hấp thụ (ODvalue) được xác định ngay lập tức bằng máy đo enzyme ở bước sóng 450 nm, tham chiếu bước sóng 630 nm.

Tính toán kết quả

Vẽ đường cong chuẩn: lấy nồng độ hàng tiêu chuẩn (ng/mL) làm tọa độ ngang, giá trị ODL là tọa độ dọc, phù hợp với đường cong logic bốn tham số (phần mềm chuyên nghiệp được khuyến nghị).

Tính toán nồng độ mẫu: thay thế phương trình đường cong tiêu chuẩn theo giá trị ODD của mẫu, nhân với bội số pha loãng để có được nồng độ thực tế.

Thông số hiệu suất

Độ nhạy: Giới hạn phát hiện 0,13 ng/mL.

Độ chính xác: Hệ số biến thiên trong tấm (CV)<10%, CV giữa tấm<15%.

Tỷ lệ thu hồi: 80-120% (phương pháp xác minh: thí nghiệm thu hồi bổ sung).

Phạm vi tuyến tính: 0,13–61,02 ng/mL, hệ số tương quan r²≥0,98.

Độ đặc hiệu: Tỷ lệ phản ứng chéo<5% với các hợp chất cấu trúc tương tự như genistein.

Lưu ý

Đặc điểm kỹ thuật hoạt động: tránh tiếp xúc với các ion kim loại với các chất đánh dấu enzyme và chất nền kết xuất màu; Xác định trong vòng 30 phút sau khi kết xuất màu, ngăn chặn sự suy giảm tín hiệu.

Kiểm soát chất lượng: Mỗi lô thí nghiệm cần bao gồm đường cong tiêu chuẩn và mẫu QC (nồng độ cao, trung bình và thấp được khuyến nghị).

Bảo vệ an toàn: Chấm dứt chất lỏng có chứa axit mạnh và cần phải đeo găng tay và kính bảo hộ để hoạt động.

Xử lý chất thải: Chất thải chứa enzyme cần được xử lý bất hoạt trước khi vứt bỏ.

Câu hỏi thường gặp

Tín hiệu thấp: kiểm tra thời gian ủ hoặc nhiệt độ không đủ; Kiểm tra xem các bước giặt có đủ hay không.

Giá trị nền cao: Có thể do giặt không hoặc nhiễu ma trận mẫu, nên tăng số lần giặt hoặc tối ưu hóa xử lý tiền mẫu.

Đường cong tiêu chuẩn bất thường: Khi hòa tan các sản phẩm tiêu chuẩn cần trộn đều, tránh bong bóng khí ảnh hưởng đến độ chính xác nồng độ.

Lưu ý: Sản phẩm này chỉ dành cho nghiên cứu khoa học và không phải là cơ sở thí nghiệm. Thao tác cụ thể xin lấy hướng dẫn của bộ thử thực tế làm chuẩn.

Chuột Soyanoside Yuan (Daidzein) ELISA Test Kit Thiên Tân Bunsheng đã luôn coi kiểm soát chất lượng là cuộc sống của doanh nghiệp và theo đuổi sự gia tăng liên tục của khả năng cạnh tranh của doanh nghiệp. Công ty trong hoạt động luôn tuân thủ: tuân thủ luật pháp, nghiêm khắc với bản thân, khoan dung, dám đảm nhận tinh thần doanh nghiệp như một tiêu chuẩn, với chất lượng vượt trội và dịch vụ tuyệt vời để duy trì và mở rộng thị trường, đáp ứng nhu cầu của khách hàng ở mức độ lớn hơn. Cùng thắng lợi với khách hàng, là mục tiêu phát triển của chúng tôi. Ben! Đối tác tin cậy của bạn. Chúng tôi sẵn sàng hợp tác chân thành với bạn để tạo ra một tương lai tốt đẹp. Bộ dụng cụ Bunsen