Hướng dẫn kỹ thuật cho bộ xét nghiệm ELISA Glutathione Peroxidase 4 (GPX4) của con người

BS-9843 Người Glutathione Peroxidase 4 (GPX4) ELISA Kit

Tổng quan sản phẩm

Bộ dụng cụ này sử dụng phương pháp hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme hai bước (ELISA) để phát hiện định lượng nồng độ glutathione peroxidase 4 (GPX4) trong huyết thanh người, huyết tương, cân bằng mô, dung dịch phân giải tế bào và nuôi cấy tế bào. GPX4 là một thành viên chủ chốt của gia đình glutathione peroxidase và đóng vai trò trung tâm trong việc ức chế chết sắt, duy trì tính toàn vẹn của màng tế bào và chống căng thẳng oxy hóa bằng cách xúc tác loại bỏ lipid peroxide bằng glutathione (GSH).

Nguyên tắc phát hiện

Phương pháp bánh sandwich lưỡng kháng thể: Các gói được liên kết bởi kháng thể với GPX4 trong mẫu, các kháng thể được đánh dấu biotin tạo thành phức hợp, streptomophilin được đánh dấu bởi horseradish peroxidase (HRP) xúc tác phản ứng kết xuất màu, cường độ kết xuất màu tỷ lệ thuận với nồng độ GPX4 trong mẫu.

Đặc hiệu: GPX4 có thể được xác định cụ thể mà không có phản ứng chéo với các chất tương tự, đảm bảo độ chính xác của phát hiện.

Thành phần Kit

Thông số kỹ thuật thành phần/Mô tả

Pre-packed Micropore tấm 96 lỗ với kháng thể GPX4 chống người

Bột đông khô tiêu chuẩn tái tổ hợp protein GPX4 của con người trước khi sử dụng pha loãng

Biotin đánh dấu kháng thể lỏng, HRP đánh dấu kháng thể GPX4 của con người

Chất nền kết xuất màu (TMB) Chất lỏng, 3,3', 5,5'-Tetramethylbiphenoline Giải pháp

Chấm dứt dung dịch axit sulfuric 2M

Giặt đệm 20 × tập trung với Twain-20

Mẫu pha loãng đệm để pha loãng mẫu nồng độ cao

Tấm niêm phong phim trong suốt cho tấm micropore niêm phong

Xử lý và bảo quản mẫu

Loại mẫu: huyết thanh, huyết tương, san lấp mô, dịch lysis tế bào, làm sạch tế bào nuôi cấy, v.v.

Phương pháp điều trị:

Huyết thanh/huyết tương: Ly tâm sau khi đông máu ở nhiệt độ phòng (3000 vòng/phút, 10), lấy ra.

Tổ chức cân bằng: Dùng nước muối sinh lý chuẩn bị 10% cân bằng, ly tâm lấy sạch.

Tế bào lysis: Ly tâm sau khi lysis (15.000 vòng/phút, 10 phút), lấy ra.

Điều kiện bảo quản: Bảo quản ngắn hạn (≤7 ngày) 2-8 ℃, bảo quản dài hạn (>7 ngày) cần đóng băng -20 ℃, tránh đóng băng và tan chảy lặp đi lặp lại.

Các bước hoạt động

Pha loãng sản phẩm tiêu chuẩn‌ Pha loãng sản phẩm tiêu chuẩn lần lượt thành 1000 với dung dịch pha loãng mẫu pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.63 pg/mL，0 pg/mL Đối chiếu với khoảng trắng.

Thêm mẫu: 100 μL tiêu chuẩn hoặc mẫu được thêm vào mỗi lỗ, ủ ở 37 ° C trong 90 phút.

Rửa: Loại bỏ chất lỏng bên trong lỗ, đổ đầy chất lỏng vào mỗi lỗ, để yên 30 giây sau đó vứt đi, lặp lại 5 lần, vỗ khô.

Kháng thể đánh dấu biotin: 100 μL kháng thể đánh dấu biotin được thêm vào mỗi lỗ, ủ ở 37 ° C trong 60 phút.

Chất nền kết xuất màu: 90 μL TMB chất nền được thêm vào mỗi lỗ, ủ ở 37 ° C trong 15-30 phút.

Phản ứng chấm dứt: 50 μL chất chấm dứt được thêm vào mỗi lỗ và độ hấp thụ được xác định ngay sau khi trộn đều.

Tính toán kết quả

Thiết lập dụng cụ: bước sóng của máy đo enzyme 450 nm (bước sóng tham chiếu 630 nm).

Xử lý dữ liệu: Lấy nồng độ hàng tiêu chuẩn (pg/mL) làm tọa độ ngang, giá trị ODL là tọa độ dọc, vẽ đường cong tiêu chuẩn. Nồng độ mẫu được tính bằng phương trình đường cong, nhân với bội số pha loãng.

Độ nhạy: 7,69 pg/mL, phạm vi phát hiện 15,62-1000 pg/mL.

Lưu ý

Phản ứng chéo: Không phản ứng chéo với các chất tương tự như GPX1, GPX2, GPX3.

Thông số kỹ thuật hoạt động:

Rửa cần phải sạch sẽ, tránh để chất lỏng còn lại ảnh hưởng đến kết quả.

Thời gian kết xuất màu được kiểm soát trong 15-30 phút để tránh độ lệch dữ liệu do kết xuất màu quá mức.

Mẫu tránh đông lạnh và tan chảy lặp đi lặp lại để ngăn ngừa sự suy thoái protein.

Kiểm soát chất lượng: Đề nghị thiết lập kiểm tra lại lỗ kép cho mỗi lô thử nghiệm, giá trị CV<10% là đủ điều kiện.

Điều kiện bảo quản

Bộ dụng cụ chưa mở: Bảo quản tránh ánh sáng 2-8 ℃, có hiệu lực trong 6 tháng.

Sau khi mở nắp: các thành phần tiêu chuẩn, kháng thể, chất nền và các thành phần khác được bảo quản theo yêu cầu của hướng dẫn, tránh đông lạnh và tan chảy lặp đi lặp lại.

Hướng dẫn này chỉ dành cho mục đích nghiên cứu khoa học và không phù hợp để chẩn đoán lâm sàng. Vui lòng đọc kỹ hướng dẫn đầy đủ trước khi vận hành và tuân thủ các thông số kỹ thuật an toàn phòng thí nghiệm.

Ghi chú: Cung cấp cho nghiên cứu khoa học sử dụng, tài liệu trên để tham khảo.

Bộ dụng cụ ELISA Glutathione Peroxidase 4 (GPX4) của con người luôn coi kiểm soát chất lượng là cuộc sống của doanh nghiệp và theo đuổi khả năng cạnh tranh ngày càng tăng của doanh nghiệp. Công ty trong hoạt động luôn tuân thủ: tuân thủ luật pháp, nghiêm khắc với bản thân, khoan dung, dám đảm nhận tinh thần doanh nghiệp như một tiêu chuẩn, với chất lượng vượt trội và dịch vụ tuyệt vời để duy trì và mở rộng thị trường, đáp ứng nhu cầu của khách hàng ở mức độ lớn hơn. Cùng thắng lợi với khách hàng, là mục tiêu phát triển của chúng tôi.