Hướng dẫn kỹ thuật cho bộ dụng cụ thử nghiệm ELISA gamma interferon (IFN-gamma) của con người

BS-0033 Người Gamma Interferon (IFN-gamma) ELISA Kit

I. Nguyên tắc phát hiện

Bộ dụng cụ này sử dụng xét nghiệm hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme (ELISA) bằng phương pháp sandwich kháng thể kép. Kháng thể đơn dòng IFN-gamma chống người được bao bọc trước trong tấm micropore, lần lượt thêm các kháng thể thử nghiệm được đánh dấu bằng mẫu, sản phẩm tiêu chuẩn và biotin để tạo thành phức hợp kháng thể kháng nguyên-enzyme. Sau khi rửa, streptavidin-HRP (streptavidin-HRP), được đánh dấu bằng peroxidase cải ngựa, được liên kết để tạo màu bằng chất nền TMB. Độ sâu màu sắc tương quan tích cực với nồng độ IFN-gamma trong mẫu, được phân tích định lượng bằng cách sử dụng máy đo enzyme để xác định độ hấp thụ (giá trị ODD).

II. Thành phần bộ dụng cụ

Thành phần 96 Cấu hình lỗ 48 Cấu hình lỗ Điều kiện bảo quản

Pre-bọc tấm micropore 12 lỗ × 8 dải 12 lỗ × 4 dải 2-8 ℃

Tiêu chuẩn đông khô 1 ống 1 ống 2-8 ℃ (sau khi tái hòa tan -20 ℃)

Kháng thể đánh dấu Biotin 100μL 100μL 2-8 ℃ (tránh ánh sáng)

Streptophilin - HRP 100 μL 100 μL 2-8 ℃ (tránh ánh sáng)

Chất lỏng pha loãng mẫu 30mL 15mL 2-8 ℃

20 × Bộ đệm giặt 20mL 10mL 2-8 ℃

Chất lỏng cơ chất TMB 10mL 5mL 2-8 ℃ Bảo vệ khỏi ánh sáng

Chấm dứt 10mL 5mL 2-8oC

Niêm phong tấm phim 4 tờ 2 tờ nhiệt độ phòng

III. Yêu cầu mẫu

1. Loại mẫu

Serum/Plasma: Chống đông máu với EDTA hoặc heparin, tránh tan máu.

Làm sạch tế bào: Ly tâm loại bỏ các hạt vật chất và tránh đông lạnh lặp đi lặp lại.

Các dịch sinh vật khác: chẳng hạn như dịch não tủy, dịch ngực và dịch bụng, cần được kiểm tra sau khi làm rõ.

2. Xử lý mẫu

Tỷ lệ pha loãng ‌ Serum/Plasma được khuyến nghị pha loãng 1: 5 (mẫu: pha loãng=1: 4) và làm sạch tế bào được khuyến nghị pha loãng 1: 2.

Điều kiện bảo quản: Bảo quản ngắn hạn (≤7 ngày) 2-8 ℃, lâu dài cần đóng băng ở -80 ℃ (tránh đóng băng và tan chảy lặp đi lặp lại).

IV. Các bước thử nghiệm

1. Chuẩn bị thuốc thử

Dung dịch rửa‌: 20 × cô đặc được pha loãng với nước cất thành 1 × dung dịch làm việc (ví dụ: 20mL cô đặc+380mL nước).

Tái hòa tan tiêu chuẩn: Tiêu chuẩn đông khô được thêm vào 1 mL dung dịch pha loãng tiêu chuẩn, để trong 15 phút, kết hợp với dung dịch mẹ nồng độ cao.

Pha loãng gradient ‌: Lấy 7 ống EP, mỗi ống thêm 500 μL pha loãng, chuyển 500 μL từ mẹ sang một ống trộn đều, pha loãng tỷ lệ lần lượt (ví dụ: 1000 → 500 → 250 → 125 → 62,5 → 31,25 → 15,625 pg/mL).

2. Mẫu và nhiệt độ

Mỗi lỗ được thêm vào tiêu chuẩn 100μL hoặc mẫu sau khi pha loãng (đề nghị kiểm tra lại lỗ).

37 độ C tránh ánh sáng 90 phút, niêm phong màng.

3. Rửa

Vứt hết chất lỏng trong lỗ, rửa 3 lần bằng dung dịch giặt 1 x, mỗi lần ngâm 1 phút, vỗ khô.

4. Kết xuất màu và kết thúc

100 μL kháng thể đánh dấu biotin được thêm vào mỗi lỗ (pha loãng trước với dung dịch kháng thể 1: 100), tránh ánh sáng ở 37 ° C trong 60 phút.

Sau khi rửa, 100 μL streptomyces ái lực-HRP được thêm vào mỗi lỗ (pha loãng trước với ABC pha loãng 1: 100), tránh ánh sáng ở 37 ° C trong 30 phút.

Sau khi rửa, 100 μL TMB chất lỏng cơ bản được thêm vào mỗi lỗ, kết xuất màu tránh ánh sáng ở 37 ℃ trong 15-20 phút.

Mỗi lỗ được thêm vào phản ứng chấm dứt 50 μL (dung dịch chuyển sang màu vàng xanh).

5. Xác định

Giá trị ODD bước sóng 450nm được xác định bằng máy đo enzyme trong vòng 30 phút (tham chiếu bước sóng 570-630nm).

V. Tính toán kết quả

Vẽ đường cong tiêu chuẩn (phù hợp với bốn tham số) với nồng độ sản phẩm tiêu chuẩn là tọa độ ngang và giá trị ODD là tọa độ dọc.

Dựa trên giá trị ODD của mẫu, nồng độ thực tế được tính bằng phương trình hồi quy, nếu mẫu pha loãng cần nhân với bội số pha loãng.

VI. Chỉ số hiệu suất

Chỉ số tham số

Độ nhạy ≤1.0 pg/mL

Phạm vi phát hiện 15,63 - 1000 pg/mL

Độ chính xác trong tấm CV<10%

Tỷ lệ thu hồi 83% -113%

Không có phản ứng chéo với IL-2, IL-4, v.v.

7. chú ý

Bảo quản thuốc thử: thanh không được sử dụng cần được bảo quản kín ở 2-8 ℃, tránh ẩm; Chất lỏng nền TMB cần tránh ánh sáng.

Xử lý mẫu: Tránh sử dụng các mẫu tan máu, lipid cao; Các mẫu có nồng độ cao cần được thử nghiệm trước để xác định bội số pha loãng.

Thông số kỹ thuật hoạt động:

Khi thêm mẫu tránh bong bóng khí, đầu súng cần thay thế.

Thời gian ôn dục được kiểm soát chặt chẽ trong phạm vi quy định, phòng ngừa bốc hơi.

Kiểm soát chất lượng: Mỗi lô thí nghiệm cần có lỗ trống (S0) và kiểm soát âm tính.

Mẹo an toàn: Chấm dứt chất lỏng có chứa axit, cần vận hành bằng găng tay; Chất thải được xử lý theo nguy cơ sinh học.

VIII. Thời hạn hiệu lực

Bộ dụng cụ có hiệu lực trong 6 tháng ở 2-8 ℃, sau khi tách các sản phẩm tiêu chuẩn đề nghị đóng băng ở -20 ℃.

Lưu ý: Trên đây chỉ để tham khảo, sản phẩm này chỉ dành cho nghiên cứu khoa học, không phải là dữ liệu thực tế, các thí nghiệm cần tuân thủ nghiêm ngặt các hướng dẫn hoặc tư vấn cho giáo viên kỹ thuật.

Human White Media 1 (IL-1) ELISA Kit Thí nghiệm sử dụng Mô tả Bookstuff đã luôn luôn xem kiểm soát chất lượng như cuộc sống của một doanh nghiệp và theo đuổi sự gia tăng liên tục của khả năng cạnh tranh của công ty. Công ty trong hoạt động luôn tuân thủ: tuân thủ luật pháp, nghiêm khắc với bản thân, khoan dung, dám đảm nhận tinh thần doanh nghiệp như một tiêu chuẩn, với chất lượng vượt trội và dịch vụ tuyệt vời để duy trì và mở rộng thị trường, đáp ứng nhu cầu của khách hàng ở mức độ lớn hơn. Cùng thắng lợi với khách hàng, là mục tiêu phát triển của chúng tôi. Ben! Đối tác tin cậy của bạn. Chúng tôi sẵn sàng hợp tác chân thành với bạn để tạo ra một tương lai tốt đẹp. Bộ dụng cụ Bunsen