Hướng dẫn kỹ thuật cho bộ dụng cụ xét nghiệm ELISA Interleukin 22 (IL-22) ở người

BS-1649 Con người Interleukin 22 (IL-22) ELISA Kit

I. Tổng quan về sản phẩm

Bộ dụng cụ này sử dụng phương pháp hấp thụ miễn dịch liên kết enzyme kép (ELISA) để phát hiện định lượng nồng độ interleukin 22 (IL-22) trong huyết thanh, huyết tương hoặc dịch thượng lưu nuôi cấy tế bào của con người. IL-22 là một cytokine được tiết ra bởi các tế bào T và NK hoạt hóa, đóng vai trò quan trọng trong phản ứng viêm, sửa chữa mô và điều hòa miễn dịch. Bộ dụng cụ này có độ nhạy cao, độ đặc hiệu cao và độ lặp lại tốt. Nó phù hợp cho các thí nghiệm nghiên cứu khoa học và thử nghiệm lâm sàng.

II. Nguyên tắc phát hiện

Kháng thể bọc: Kháng thể đơn dòng IL-22 chống người được bọc trước trong tấm micropore, kết hợp với IL-22 trong mẫu để tạo thành phức hợp pha rắn.

Kháng thể đánh dấu biotin: Kháng thể chống IL-22 của con người được đánh dấu biotin được thêm vào, liên kết với IL-22 để tạo thành cấu trúc bánh sandwich.

Enzyme binding‌: streptomycin được đánh dấu bằng peroxidase cải ngựa (HRP) được thêm vào, liên kết cụ thể với biotin.

Phản ứng kết xuất màu: Kết xuất màu nền (TMB) được thêm vào, độ đậm màu tỷ lệ thuận với nồng độ IL-22.

Chấm dứt&Xác định: Thêm phản ứng chấm dứt để xác định độ hấp thụ (ODvalue) ở bước sóng 450nm và tính toán nồng độ mẫu bằng đường cong tiêu chuẩn.

III. Thành phần bộ dụng cụ

Thành phần Thông số kỹ thuật Số lượng

Tấm micropore 96 lỗ/tấm 1 miếng

Tiêu chuẩn (đông khô) 2ng/chiếc 2 chiếc

Dung dịch pha loãng tiêu chuẩn 10mL 1 lọ

Kháng thể đánh dấu Biotin 6mL 1 lọ

Đánh dấu HRP Streptophilin Affinity 6mL 1 lọ

Dung dịch rửa (20 ×) 50mL 1 chai

Chất lỏng kết xuất màu (TMB) 11mL 1 lọ

Dung dịch chấm dứt (2M H₂ SO₄) 6mL 1 lọ

IV. Yêu cầu mẫu

Huyết thanh/huyết tương‌: Để ở nhiệt độ phòng trong 30 phút sau khi thu thập, ly tâm (2000 × g, 15 phút) được làm sạch, -20 ℃ hoặc -80 ℃, tránh đông lạnh lặp đi lặp lại.

Làm sạch tế bào: Ly tâm loại bỏ các mảnh vỡ tế bào, phát hiện ngay lập tức hoặc bảo quản theo gói.

Lưu ý: Tránh các chất bảo quản như natri azide (NaN₃) hoặc EDTA trong mẫu để không ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm.

V. Các bước hoạt động

Pha loãng sản phẩm tiêu chuẩn: Tái hòa tan sản phẩm tiêu chuẩn đông khô thành 2ng/mL với dung dịch pha loãng sản phẩm tiêu chuẩn, pha loãng theo tỷ lệ nhân (ví dụ: 2ng/mL, 1ng/mL, 0,5ng/mL, 0,25ng/mL, 0,125ng/mL, 0,0625ng/mL), lỗ 0ng/mL là đối chứng trống.

Thêm mẫu: 100 μL tiêu chuẩn hoặc mẫu được thêm vào mỗi lỗ, ủ ở 37 ° C trong 90 phút.

Rửa: Loại bỏ chất lỏng bên trong lỗ, rửa tấm bằng chất lỏng rửa 3 lần, mỗi lần ngâm 1 phút.

Kháng thể đánh dấu biotin: 100 μL được thêm vào mỗi lỗ và ủ ở 37 ° C trong 60 phút.

Kết hợp enzyme: 100 μL được thêm vào mỗi lỗ, ủ ở 37 độ C trong 30 phút.

Kết xuất màu&Chấm dứt‌: 90 μL TMB được thêm vào mỗi lỗ, 15 phút kết xuất màu tránh ánh sáng và 50 μL terminator được thêm vào.

Xác định: đọc giá trị ODD ở bước sóng 450nm, vẽ đường cong chuẩn và tính toán nồng độ mẫu.

VI. Tính toán kết quả

Lấy nồng độ sản phẩm tiêu chuẩn làm tọa độ ngang, giá trị ODD làm tọa độ dọc, vẽ đường cong tiêu chuẩn.

Nồng độ tương ứng trên đường cong tiêu chuẩn theo giá trị ODD của mẫu, nhân với bội số pha loãng (nhân 1 nếu mẫu không pha loãng).

Đề nghị sử dụng phần mềm chuyên nghiệp như ELISA Calc để phù hợp với đường cong và tính toán nồng độ.

VII. Chỉ số hiệu suất

Độ nhạy: Giới hạn phát hiện là 0,015ng/mL.

Độ chính xác: Hệ số biến thiên trong lô (CV)<10%, CV liên lô<15%.

Phạm vi tuyến tính: 0,0625-2ng/mL, hệ số tương quan (R²)>0,99.

Tỷ lệ thu hồi: Các mẫu có nồng độ cao, trung bình và thấp được phục hồi theo tiêu chuẩn, với tỷ lệ thu hồi từ 85% -115%.

Đặc hiệu: Không phản ứng chéo với các cytokine như IL-10, IL-17, IL-23.

8. chú ý

Bảo quản thuốc thử: Bộ dụng cụ chưa mở được bảo quản ở 2-8 ℃, có hiệu lực trong 12 tháng; Các sản phẩm tiêu chuẩn sau khi mở, kháng thể đánh dấu biotin, dấu hiệu HRP cần được đóng băng để tránh đóng băng nhiều lần.

Thông số kỹ thuật hoạt động: tránh tạo bọt khí khi pipet, đảm bảo chất lỏng trong lỗ thoát ra khi giặt.

Bảo vệ an toàn‌: Chấm dứt có chứa axit mạnh và đeo găng tay và kính bảo hộ khi vận hành.

Kiểm soát chất lượng: Mỗi lô thí nghiệm cần thiết lập kiểm tra lại lỗ đôi, kiểm tra lặp lại khi giá trị ODD bất thường.

IX. Phân tích các vấn đề thường gặp

Vấn đề Hiện tượng có thể Nguyên nhân Giải pháp

Đường cong tiêu chuẩn Độ lệch tuyến tính Tiêu chuẩn pha loãng sai Điều chỉnh lại Tiêu chuẩn đảm bảo tỷ lệ pha loãng

Giá trị mẫu OD Nồng độ mẫu vượt quá phạm vi phát hiện Pha loãng mẫu sau khi phát hiện lại

Kết xuất màu quá sáng hoặc không kết hợp enzyme bất hoạt kiểm tra ngày hết hạn của thuốc thử, thay thế thuốc thử mới

Có chất lỏng còn lại bên trong lỗ sau khi rửa số lần giặt không đủ hoặc không đủ mạnh để tăng số lần giặt, đập mạnh vào tấm lỗ khô

Lưu ý: Trên đây chỉ để tham khảo, thuốc thử này chỉ dành cho nghiên cứu khoa học, không phải là dữ liệu thực tế, các thí nghiệm cần tuân thủ nghiêm ngặt các hướng dẫn hoặc tư vấn cho giáo viên kỹ thuật.

Thiên Tân luôn coi kiểm soát chất lượng là cuộc sống của doanh nghiệp, theo đuổi sức cạnh tranh của doanh nghiệp không ngừng nâng cao. Công ty trong hoạt động luôn tuân thủ: tuân thủ luật pháp, nghiêm khắc với bản thân, khoan dung, dám đảm nhận tinh thần doanh nghiệp như một tiêu chuẩn, với chất lượng vượt trội và dịch vụ tuyệt vời để duy trì và mở rộng thị trường, đáp ứng nhu cầu của khách hàng ở mức độ lớn hơn. Cùng thắng lợi với khách hàng, là mục tiêu phát triển của chúng tôi. Ben! Đối tác tin cậy của bạn. Chúng tôi sẵn sàng hợp tác chân thành với bạn để tạo ra một tương lai tốt đẹp. Bộ dụng cụ Bunsen