Hướng dẫn kỹ thuật cho bộ dụng cụ kiểm tra ELISA Medium 23 (IL-23) của con người

BS-0194 Human White Media 23 (IL-23) Bộ dụng cụ ELISA

I. Tổng quan về sản phẩm

Bộ dụng cụ này sử dụng công nghệ xét nghiệm hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme lưỡng kháng thể (ELISA), được thiết kế đặc biệt để phát hiện định lượng nồng độ interleukin 23 (IL-23) trong huyết thanh, huyết tương, cân bằng mô và dịch thượng bào của con người. ‌ Các thành phần cốt lõi bao gồm các tấm enzyme của các kháng thể được bao bọc trước, các sản phẩm tiêu chuẩn, kháng thể phát hiện đánh dấu biotin và chất nền tạo màu (TMB) đảm bảo độ nhạy cao (thấp tới 0,15 pg/mL) và đặc hiệu. Toàn bộ quá trình thí nghiệm khoảng 3,5 giờ, áp dụng cho thí nghiệm nghiên cứu khoa học, nghiêm cấm sử dụng chẩn đoán lâm sàng. ‌

II. Nguyên tắc phát hiện

Liên kết kháng thể: IL-23 liên kết với kháng thể bị bắt trước để tạo thành phức hợp. ‌

Kết hợp kháng thể phát hiện biotin và streptomycin được đánh dấu bằng peroxidase cải ngựa, tạo màu thông qua phản ứng enzyme.

Phân tích định lượng: Sau khi kết xuất màu nền TMB, phản ứng chấm dứt, giá trị hấp thụ bước sóng 450 nm, nồng độ IL-23 tương quan tích cực với giá trị OD. ‌

III. Thành phần bộ dụng cụ

| Thành phần | Thông số kỹ thuật/Số lượng | Điều kiện lưu trữ |

|-||-|

96 lỗ/tấm | 2-8 ℃ tránh ánh sáng |

Tiêu chuẩn (bột đông khô) | 2 chai | -20 ℃ Bảo quản lâu dài |

| Kháng thể đánh dấu Biotin | 1 cái (cô đặc) | 2-8 ℃ Ngắn hạn |

Chất nền kết màu (TMB) | 12 mL | 2-8 ℃ Tránh ánh sáng |

12 mL Nhiệt độ phòng

20×dung dịch giặt 50 mL nhiệt độ phòng

Lưu ý: Dung dịch pha loãng mẫu cần chọn dung dịch pha loãng chuyên dụng theo loại mẫu (huyết thanh/huyết tương/tế bào thanh lọc).

IV. Xử lý mẫu

Huyết thanh/huyết tương: đông máu ở nhiệt độ phòng trong 30 phút, 1000 × g ly tâm trong 15 phút, lấy chất lỏng sạch để tránh tan máu.

Làm sạch tế bào: trực tiếp ly tâm để loại bỏ các mảnh vỡ tế bào, mẫu chưa được phát hiện cần được bảo quản ở -20 ℃, tránh đông lạnh lặp đi lặp lại.

Tổ chức san lấp mặt bằng: theo trọng lượng của mô thêm dung dịch nứt sau khi ly tâm được làm sạch. ‌

V. Các bước hoạt động

Cân bằng thuốc thử: Tất cả các thành phần được để ở nhiệt độ phòng trong 20 phút, bồn tắm nước rửa cô đặc hòa tan kết tinh. ‌

Phản ứng mẫu:

Sau khi pha loãng gradient tiêu chuẩn, lỗ tiêu chuẩn được thêm vào, thể tích mẫu 25 μL. ‌

Lần lượt thêm kháng thể kiểm tra, phức hợp enzyme, ấp trứng 37 độ C 60 phút.

Rửa màu: Rửa chất lỏng 3 lần, thêm phản ứng tránh ánh sáng của chất nền TMB trong 15 phút, chấm dứt chất lỏng. ‌

Đọc: Enzyme scalper 450 nm bước sóng để xác định giá trị ODD, bốn tham số phù hợp để tính toán nồng độ.

VI. Thông số hiệu suất

Phạm vi phát hiện: 15,6-1000 pg/mL (khoảng tuyến tính).

Độ nhạy: 0,15 pg/mL.

Độ chính xác: Hệ số biến thiên trong tấm/giữa tấm (CV)<10%. ‌

Tỷ lệ phục hồi: 80% -120%.

7. chú ý

Bảo vệ an toàn: Đeo găng tay và kính bảo hộ khi vận hành để tránh tiếp xúc với chất kết thúc và chất nền TMB. ‌

Bảo quản thuốc thử: Bộ dụng cụ không mở 2-8 ℃ có thể được lưu trữ trong 6 tháng, -20 ℃ có thể được lưu trữ trong 1 năm; Thuốc thử đã mở cần dùng hết trong vòng 7 ngày.

Đặc điểm thử nghiệm:

Các lô thuốc thử khác nhau cấm trộn lẫn. ‌

Khi giặt phải đập khô tấm tiêu chuẩn enzym, tránh tiếp xúc trực tiếp với giấy thấm nước trong lỗ. ‌

Phản ứng tạo màu cần tránh ánh sáng và đọc trong vòng 30 phút sau khi chấm dứt.

Ghi chú: Trên đây chỉ để tham khảo, không phải là dữ liệu thực tế, thí nghiệm cần tuân thủ nghiêm ngặt hướng dẫn hoặc tư vấn cho giáo viên kỹ thuật.