Nhân tố tăng trưởng nội mô mạch máu A (VEGF-A) ELISA Kit Hướng dẫn sử dụng thử nghiệm

BS-9809 Nhân tố tăng trưởng nội mô mạch máu A (VEGF-A) ELISA Kit

I. Tổng quan về sản phẩm

Bộ dụng cụ này sử dụng phương pháp hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme lưỡng kháng thể (ELISA), đặc biệt để phát hiện nồng độ VEGF-A trong huyết thanh người, huyết tương, san lấp mô, làm sạch tế bào và các mẫu khác. Chỉ dùng cho nghiên cứu khoa học.

II. Thành phần bộ dụng cụ

Prepacked bởi microporous board: 12 lỗ × 8 (96 lỗ thông số kỹ thuật) hoặc 12 lỗ × 4 (48 lỗ thông số kỹ thuật), prepacked bởi kháng thể chống VEGF-A bắt.

Tiêu chuẩn: bột đông khô, cần pha loãng tỷ lệ sau khi hòa tan với dung dịch pha loãng tiêu chuẩn (gradient nồng độ khuyến nghị: 10, 3,33, 1,11, 0,37, 0,12, 0,04, 0 ng/mL).

Xét nghiệm kháng thể-HRP: Kháng thể chống VEGF-A được dán nhãn bởi horseradish peroxidase.

Dung dịch giặt đệm‌: 20×dung dịch cô đặc, cần pha loãng với nước cất theo tỷ lệ 1:20.

Dung dịch cơ bản: TMB Color Rendering Liquid A/B, trộn 1:1 trước khi sử dụng và sử dụng hết trong vòng 15 phút.

Dung dịch chấm dứt: dung dịch 2M.

Mẫu pha loãng: Được sử dụng để pha loãng các mẫu có nồng độ cao.

Niêm phong tấm phim: 2 tờ để niêm phong tấm micropore khi sưởi ấm.

III. Nguyên tắc thí nghiệm

VEGF-A liên kết với các kháng thể bị bắt trước, tạo thành phức hợp "kháng thể-kháng nguyên"; Một "cấu trúc bánh sandwich" được hình thành sau khi các kháng thể phát hiện dấu HRP được thêm vào. Các chất không liên kết được loại bỏ sau khi rửa, chất nền TMB được thêm vào để tạo màu (màu xanh), chuyển sang màu vàng sau khi chấm dứt phản ứng. Bước sóng 450nm xác định độ hấp thụ (giá trị ODD) và nồng độ tỷ lệ thuận với giá trị ODD.

IV. Các bước thử nghiệm

Chuẩn bị mẫu ‌

Huyết thanh/huyết tương: ly tâm loại bỏ các hạt vật chất, tránh tan máu; Bảo quản 2-8 ℃ ≤48 giờ, bảo quản lâu dài cần -20 ℃/-80 ℃ (tránh đông lạnh và tan chảy lặp đi lặp lại).

Tế bào thượng thanh: ly tâm thượng thanh, tránh hàm lượng protease cao.

Chuẩn bị thuốc thử

Chất lỏng rửa: Khi kết tinh ở nhiệt độ phòng của chất lỏng rửa cô đặc, bồn tắm nước 40 ℃ được pha loãng theo 1: 20 sau khi hòa tan.

Sản phẩm tiêu chuẩn: sau khi hòa tan gấp đôi pha loãng, hiện phối hiện dùng.

Chất nền: TMB A/B lỏng 1: 1 trộn, bảo quản khỏi ánh sáng.

Quy trình hoạt động‌

Thêm mẫu: 100 μL tiêu chuẩn/mẫu được thêm vào mỗi lỗ, ủ ở 37 ° C trong 90 phút.

Rửa: Vứt chất lỏng bên trong lỗ khô, ngâm với chất lỏng rửa 1 phút/lần, lặp lại 3 lần.

Thêm kháng thể thử nghiệm: 100 μL kháng thể đánh dấu HRP được thêm vào mỗi lỗ, ủ ở 37 ° C trong 60 phút.

Rửa: Đồng bộ hóa 2.

Kết xuất màu: 90 μL TMB chất nền được thêm vào mỗi lỗ, ủ ở 37 ° C trong 15-20 phút.

Chấm dứt: Thêm 100 μL chất chấm dứt cho mỗi lỗ, đo giá trị ODD trong vòng 30 phút sau khi trộn đều.

Kết quả tính toán ‌

Vẽ đường cong chuẩn với nồng độ hàng tiêu chuẩn (ng/mL) làm tọa độ ngang và giá trị ODL là tọa độ dọc.

Tính nồng độ theo giá trị ODD của mẫu, nhân với bội số pha loãng để có kết quả.

V. Chú ý

Bảo quản thuốc thử: Không sử dụng bộ dụng cụ cần bảo quản tránh ánh sáng 2-8 ℃, thời hạn hiệu lực 6 tháng; Các sản phẩm tiêu chuẩn phục hồi có thể phân bổ đông lạnh, tránh đông lạnh nhiều lần.

Xử lý mẫu: Tránh sử dụng các mẫu chứa để ngăn chặn hoạt động HRP.

Đặc điểm kỹ thuật hoạt động: nhu cầu di chuyển, tránh bong bóng; Nhu cầu giặt, phòng ngừa ô nhiễm chéo.

Bảo vệ an toàn: Chất kết thúc chứa axit mạnh và cần được vận hành bằng găng tay.

VI. Kết quả mong muốn

Độ nhạy ≤ 1,54 pg/mL (thực tế theo hướng dẫn).

Phạm vi phát hiện: Phạm vi điển hình là 3,12-200 pg/mL với một số bộ được mở rộng đến 62,5-2000 pg/mL.

Độ lặp lại: Hệ số biến đổi trong/giữa các tấm<10% và<15% tương ứng.

VII. Câu hỏi thường gặp

Q: Màu sắc quá sáng hoặc quá sâu?

A: Điều chỉnh bội số pha loãng mẫu hoặc thời gian ủ; Hãy chắc chắn rằng các cơ sở là tươi để xây dựng.

Q: Độ lệch tuyến tính của đường cong chuẩn?

A: Kiểm tra hoạt động tái hòa tan để tránh bong bóng; Thay thế đầu hút pipet.

Lưu ý: Trên đây chỉ để tham khảo, sản phẩm này chỉ dành cho nghiên cứu khoa học, không phải là dữ liệu thực tế, các thí nghiệm cần tuân thủ nghiêm ngặt các hướng dẫn hoặc tư vấn cho giáo viên kỹ thuật.

Thiên Tân luôn coi kiểm soát chất lượng là cuộc sống của doanh nghiệp, theo đuổi sức cạnh tranh của doanh nghiệp không ngừng nâng cao. Công ty trong hoạt động luôn tuân thủ: tuân thủ luật pháp, nghiêm khắc với bản thân, khoan dung, dám đảm nhận tinh thần doanh nghiệp như một tiêu chuẩn, với chất lượng vượt trội và dịch vụ tuyệt vời để duy trì và mở rộng thị trường, đáp ứng nhu cầu của khách hàng ở mức độ lớn hơn. Cùng thắng lợi với khách hàng, là mục tiêu phát triển của chúng tôi. Ben! Đối tác tin cậy của bạn. Chúng tôi sẵn sàng hợp tác chân thành với bạn để tạo ra một tương lai tốt đẹp.