Phương pháp đếm tế bào：Từ bảng đếm đến máy đếm tế bào hoàn toàn tự động

Nhiều thí nghiệm và thử nghiệm phổ biến đòi hỏi các nhà khoa học phải tính toán chính xác số lượng hoặc mật độ của các tế bào. Các hoạt động này bao gồm bảo trì nuôi cấy tế bào đơn giản như di truyền tế bào cũng như các thí nghiệm định lượng như qPCR. Việc đếm tế bào có thể được thực hiện theo nhiều cách khác nhau và bài viết này sẽ cung cấp một cái nhìn toàn diện về các phương pháp này và những ưu điểm và nhược điểm của chúng.

1 Bảng đếm/tế bào máuđếmTrang chủ

Sử dụng Blood CellsđếmTrang chủTrước tiên, hãy làm sạch bằng 70% rượu và giấy ống kính.đếmTrang chủSau đó nhẹ nhàng đặt tấm che lên bảng đếm. Hiện tượng vòng Newton (mô hình màu giống như vòng đồng tâm) có thể được quan sát nếu tấm che được đặt đúng cách. Một phần nhỏ của hệ thống treo tế bào được lấy bằng pipet và đặt pipet ở rìa của bảng đếm, cho phép hệ thống treo chảy qua mao dẫn vào buồng đếm. Nếu cần phát hiện hoạt động của tế bào, Taizhuang nên được trộn vào hệ thống treo tế bào theo tỷ lệ 1: 1 trước khi thêm vào buồng đếm.

Tế bào máuđếmTrang chủĐó là phương pháp ban đầu được sử dụng đặc biệt để có được số lượng tế bào chính xác, với các lưới đặc biệt trên bảng đếm. Thông thường, các ô vuông lớn là 1 mm × 1 mm và được chia thành các ô vuông nhỏ 0,05 mm × 0,05 mm. Các cạnh của buồng đếm được thiết kế để giữ các tấm che ở 0,1 mm phía trên lưới đánh dấu, tạo ra một khu vực có thể tích đã biết.

Sau khi kính hiển vi tập trung vào một khu vực trong phòng đếm, sử dụngMáy đếmCác tế bào được đếm. Khu vực 1 mm vuông (100 nal lít) thường được sử dụng và số lượng vật kính 4 hoặc 10 lần được sử dụng, nhưng sự lựa chọn chính xác phụ thuộc vào kích thước tế bào và mật độ trong đình chỉ. Quá trình này thường được lặp lại trong bốn khu vực 1 mm vuông khác nhau, kết quả được tính trung bình. Nếu hoạt động của tế bào được phát hiện, các tế bào sống và chết nên được đếm riêng biệt, trong đó các tế bào chết được nhuộm màu xanh lam bởi Taizhang Blue do tổn thương màng.

Hình 1 Máutế bàoSơ đồ lưới bảng đếm

Ưu điểm và nhược điểm

Đếm thủ công là một cách để tiết kiệm ngân sách, nhưng nó cũng tốn thời gian và tẻ nhạt nhất. Độ tin cậy thấp do lỗi của con người, đặc biệt là khi thực hiện nhiều lần đếm liên tiếp. Ngoài ra, việc đếm thường xuyên cũng có thể dẫn đến mỏi mắt. Nếu phòng thí nghiệm chỉ thỉnh thoảng đếm và không yêu cầu độ chính xác cao, thì các tế bào máuMáy đếmĐó là một lựa chọn không tồi. Nhưng phương pháp này dường như không đủ khi cần đếm thường xuyên, cải thiện độ chính xác hoặc ứng dụng thông lượng cao. Ngoài ra, đếm thủ công khó phân biệt các loại tế bào khác nhau trong đình chỉ trừ khi các loại tế bào khác nhau đáng kể về kích thước hoặc hình dạng.

2 Tế bào tự độngMáy đếm

Tế bào tự độngMáy đếmLà một giải pháp nhanh chóng, dễ dàng và tự động để đếm thủ công. Chúng dựa trên các tế bào máu.Máy đếmNguyên tắc tương tự, hoạt động được thực hiện bằng cách đếm các tế bào nhiều lần trong một khu vực đã biết và lấy trung bình. Các thiết bị này cũng có thể phân biệt giữa tế bào sống và tế bào chết bằng cách loại trừ thuốc nhuộm như Taizhuang Blue. Tế bào tự độngMáy đếmNó có thể là một thiết bị độc lập hoặc kết nối với máy tính để sử dụng. Hầu hếtMáy đếmNgoài việc cung cấp số lượng tế bào, thông tin như kích thước tế bào có thể được thống kê.

Số lượng tế bào huỳnh quangTrang chủVí dụ: Luna-FL ™ Số lượng tế bào huỳnh quang képTrang chủCó thể phân biệt giữa tế bào sống và tế bào chết và đếm tế bào bằng cách sử dụng các chất nhuộm phổ biến như acridine cam và propionine iodide. Các loại số lượng tế bàoTrang chủNó cũng xuất sắc trong việc đếm các tế bào trong môi trường nuôi cấy có thể bị ô nhiễm bởi các mảnh không phải tế bào, chẳng hạn như các tế bào nguyên mẫu, vì thuốc nhuộm có thể phân biệt rõ ràng các tế bào.

Ưu điểm và nhược điểm

tự độngMáy đếmPhù hợpPhổ thôngSố lượng tế bào và kiểm tra hoạt tính. Nó hoạt động đơn giản và ít tốn kém hơn, làm giảm đáng kể số lượng lao động đếm bằng tay. tự độngMáy đếmChính xác và đáng tin cậy, nhưng có thể có những thách thức khi đếm các hình dạng bất thường, rất nhỏ, hệ thống treo cực kỳ mỏng hoặc chứa nhiều tế bào cần phân biệt. Đối với hầu hết các loại tế bào và ứng dụng, tự độngMáy đếmCung cấp hiệu suất đếm hiệu quả cao.

3 CoulterMáy đếm

CoulterMáy đếmKhông phải là một dụng cụ quang học, nhưng các tế bào đếm bằng cách đo sự thay đổi điện trở trong các kênh vi mô. Điện trở của tế bào cao hơn dung dịch điện giải đình chỉ, làm tăng điện trở một thời gian ngắn khi tế bào đi qua kênh, một thay đổi tăng lên khi kích thước tế bào tăng lên. CoulterMáy đếmHoạt động tương tự như tự độngMáy đếmNhưng trước khi sử dụng cần chạy thử nghiệm trống và rửa sạch thiết bị sau khi sử dụng.

Ưu điểm và nhược điểm

Kurt.Máy đếmNó nhanh và có thể đếm chính xác các tế bào có kích thước khác nhau, vì vậy nó thường được sử dụng để đếm tế bào máu trong bệnh viện. Tuy nhiên, nó không thể phân biệt giữa tế bào sống và tế bào chết và đếm chính xác các tế bào tạo thành cụm. Ngoài ra, nó có yêu cầu bảo trì cao hơn.

4 Dòng Cellometer

Thường được sử dụng trong phân tích tế bào chi tiết hơn, Flow Cellometer được trang bị công nghệ phát hiện huỳnh quang để phát hiện các thành phần nội bào được đánh dấu. Không phải tất cả các máy đo dòng chảy đều có thể đếm tế bào, nhưng các máy đo dòng chảy có chức năng đo khối lượng cung cấp số lượng tế bào chính xác cao và có thể phân biệt các loại tế bào bằng các kháng thể được đánh dấu huỳnh quang.

Ưu điểm và nhược điểm

Máy đo tế bào dòng chảy mạnh mẽ nhưng đắt tiền, thường từ 40.000 đến hơn 100.000 đô la, vì vậy nó hiếm khi được sử dụng cho số lượng tế bào thông thường.

5 Các phương pháp đếm tế bào khác

Phép đo phổ đôi khi được sử dụng để ước tính mật độ tế bàoĐộ. Bởi vì các tế bào là mây, khi mật độ tế bào tăng lên, ánh sáng đi qua đĩa đo sẽ giảm. Tuy nhiên, vì máy quang phổ không đếm trực tiếp các tế bào, chỉ đo độ hấp thụ và các biến khác trong đình chỉ có thể ảnh hưởng đến độ hấp thụ, phương pháp này không đáng tin cậy.

Văn hóa là một phương pháp đếm khác chỉ áp dụng cho các tế bào hình thành thuộc địa (như vi khuẩn). Sau khi đình chỉ tế bào đã được pha loãng và đánh dấu vào đĩa petri, số lượng khuẩn lạc được đếm để tính mật độ tế bào của đình chỉ ban đầu. Nhưng vì cần phải chờ các thuộc địa phát triển, phương pháp nuôi cấy là phương pháp chậm nhất.

Máy đếm tế bào tự động: Đếm chính xác hơn dẫn đến khoa học chất lượng cao hơn

Điểm sinh học cung cấp cho bạn một loạt các máy đếm tế bào hoàn toàn tự động với độ chính xác cao, bao gồm máy đếm tế bào trường sáng, máy đếm tế bào huỳnh quang, máy đếm vi khuẩn tự động, và tất cả các loại phụ kiện tiêu hao toàn diện. Nếu bạn có bất kỳ nhu cầu liên quan, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi!