Sử dụng điểm thànhLUNA-FX7 ™ Máy đếm tế bào tự động Tối ưu hóa đánh giá tế bào tinh trùng

Từ khóa: Máy đếm tế bào tự động, đánh giá tế bào tinh trùng dựa trên hình ảnh, số lượng tế bào, đánh giá tỷ lệ sống sót, nhuộm kép

1 Giới thiệu

Đánh giá tế bào tinh trùng (còn được gọi là phân tích tinh dịch), đóng một vai trò quan trọng trong việc đánh giá khả năng sinh sản của nam giới. Mặc dù nó không phải là một thước đo trực tiếp về khả năng sinh sản, nhưng khả năng sinh sản của nam giới có tác động quan trọng đến cả khả năng sinh sản của con người và chăn nuôi, vì vậy việc đánh giá tế bào tinh trùng rất được quan tâm.

Hiện tại, đánh giá tế bào tinh trùng có thể được thực hiện thông qua streaming cytomy và các công cụ phân tích dựa trên hình ảnh. Chọn LUNA-FX7 ™ Các thiết bị tự động như máy đếm tế bào tự động có thể sử dụng hình ảnh để phân tích mẫu tinh trùng một cách nhanh chóng và thuận tiện. Tuy nhiên, do sự độc đáo về hình thái và tính chất của tế bào tinh trùng so với tế bào động vật có vú, cần tối ưu hóa các thông số phân tích và chọn thuốc nhuộm phù hợp.

Nghiên cứu này đã tiến hành phân tích so sánh các thuốc nhuộm huỳnh quang như SYBR14, Acidine Orange (AO) và Propidine iodide (PI) để tối ưu hóa điểm thành LUNA-FX7. ™ Khả năng đánh giá các tế bào tinh trùng. Nghiên cứu này nhằm mục đích đánh giá hiệu quả của các kết hợp thuốc nhuộm khác nhau và tối ưu hóa cài đặt thông số để đánh giá tế bào tinh trùng.

2 Phương pháp&Vật liệu

2.1 Chuẩn bị mẫu

rã đông các mẫu tinh dịch đông lạnh từ gia súc và thay thế bộ đệm bằng PBS. Tùy thuộc vào mẫu, mẫu tinh dịch được pha loãng trong PBS theo tỷ lệ khoảng 1:20 đến 1:40.

2.2 Nhuộm huỳnh quang

1. Trộn:

Các tế bào tinh trùng trong 18 μL PBS

Thuốc nhuộm huỳnh quang màu xanh lá cây và đỏ pha trộn 2μL

2. ủ ở 37 ℃ trong 10 phút

3. Tải mẫu vào slide thích hợp

Sử dụng LUNA-FX7 ™ Phân tích

Bảng 1: Điểm LUNA-FX7 ™ Cài đặt tham số tối ưu để đánh giá tế bào tinh trùng ở chế độ nâng cao

3 Sơ đồ đếm tế bào và kết hợp thuốc nhuộm để tối ưu hóa đánh giá tế bào tinh trùng

tổng kết: Cả SYBR14/PI và AO/PI đều được sử dụng để đánh giá sức sống của tinh trùng, nhưng SYBR14/PI hoạt động tốt hơn.

Chọn LUNA-FX7 ™ Giao thức mặc định đã được tối ưu hóa cho các tế bào động vật có vú thông thường, nhưng đánh giá tế bào tinh trùng cần điều chỉnh các thông số như mức độ phơi sáng, kích thước tế bào và độ nhạy khử trùng. Ví dụ: điều chỉnh kích thước tìm kiếm tối thiểu từ 3 đến 7 và độ nhạy khử trùng từ 5 đến 7 để cải thiện hiệu suất phát hiện (Bảng 1). Ngoài ra, mức phơi sáng cho nhuộm SYBR14/PI và AO/PI được đặt thành GF 6 và RF 9 tương ứng.

Trên cơ sở này, chúng tôi đã tiến hành phân tích so sánh các phương pháp nhuộm SYBR14/PI và AO/PI. Với hiệu quả đã biết của phương pháp nhuộm SYBR14/PI trong đánh giá tế bào tinh trùng, chúng tôi tập trung vào hiệu suất của phương pháp nhuộm AO/PI. Kết quả cho thấy cả hai phương pháp nhuộm có thể được sử dụng để đánh giá tế bào tinh trùng (Hình 1). Tuy nhiên, ứng dụng của SYBR14 trong nhuộm tế bào tinh trùng tốt hơn AO, cho thấy các đặc tính hóa học của SYBR14 có thể phù hợp hơn với ứng dụng này.

Hình 1. Hình ảnh huỳnh quang của các tế bào tinh trùng được nhuộm bằng hai loại thuốc nhuộm khác nhau (SYBR14/PI và AO/PI). Hình ảnh kết hợp này cho thấy trường sáng, ánh sáng xanh, ánh sáng đỏ và hình ảnh được đánh dấu sau khi phân tích. Hình ảnh được đánh dấu là hình ảnh kênh huỳnh quang tổng hợp, trong đó vòng tròn màu đỏ biểu thị các tế bào chết và vòng tròn màu xanh lá cây biểu thị các tế bào sống.

4 kết luận

Nghiên cứu này cho thấy phương pháp nhuộm SYBR14/PI và AO/PI có thể được sử dụng để đánh giá tỷ lệ sống sót của tế bào tinh trùng, nhưng SYBR14/PI hoạt động tốt hơn. Ngoài ra, việc điều chỉnh mức phơi sáng và các thông số khác là rất quan trọng đối với hiệu suất phát hiện tổng thể. Chọn LUNA-FX7 ™ Nó không được tối ưu hóa đặc biệt cho các mẫu tinh trùng, nhưng với tỷ lệ pha loãng mẫu được đề nghị và tối ưu hóa điều kiện hình ảnh, nó vẫn có thể cung cấp một chương trình đánh giá tế bào tinh trùng nhanh chóng và thuận tiện.