Trong lĩnh vực nghiên cứu hóa học, sinh học, vật liệu và dược phẩm, máy quang phổ huỳnh quang phân tử như một đầu dò tiết lộ các đặc tính phát quang vi mô của vật chất, bằng cách kích thích mẫu để sản xuất huỳnh quang, xác định các thông số như phổ phát xạ, phổ kích thích, cường độ huỳnh quang và tuổi thọ. Nó được sử dụng rộng rãi trong phân tích cấu hình protein, phát hiện DNA, phát triển đầu dò huỳnh quang và nhận dạng chất ô nhiễm môi trường. Máy quang phổ huỳnh quang phân tử có độ nhạy cao (lên đến mức ppb) và tính chọn lọc, làm cho nó trở thành một lựa chọn cho các phòng thí nghiệm hiện đại. Để đảm bảo dữ liệu chính xác và ổn định dụng cụ, phải tuân theo quy trình vận hành khoa học, chuẩn mực.

Bước 1: Chuẩn bị môi trường và làm nóng thiết bị
Đảm bảo môi trường phòng thí nghiệm sạch sẽ, tránh ánh sáng và ổn định nhiệt độ (20-25 ° C), tránh rung động mạnh và nhiễu điện từ. Bật nguồn thiết bị, lần lượt khởi động nguồn sáng (đèn xenon hoặc laser), máy chủ và hệ thống làm mát (nếu cần). Làm nóng trước 30 phút để đầu ra nguồn sáng ổn định, nhiệt độ máy dò không đổi và tránh trôi cơ bản.
Bước 2: Chuẩn bị mẫu và lắp đặt mẫu
Các mẫu dung dịch với nồng độ thích hợp được xây dựng theo nhu cầu thử nghiệm, tránh "tự hấp thụ" hoặc "dập tắt huỳnh quang" do nồng độ quá cao. Sử dụng đĩa tỷ lệ thạch anh sạch (kính hấp thụ ánh sáng cực tím mạnh và không phù hợp), tiêm chất lỏng đến 2/3-3/4 chiều cao của đĩa. Lau sạch vân tay và giọt nước trên tường đĩa, nhắm thẳng đường đánh dấu đĩa so màu theo hướng ánh sáng, nhẹ nhàng đặt vào kho mẫu, tránh làm xước bề mặt quang học.
Bước 3: Cài đặt tham số và lựa chọn chế độ
Thiết lập chế độ kiểm tra bằng cách điều khiển phần mềm:
Phổ phát xạ: bước sóng kích thích cố định, phạm vi bước sóng phát xạ quét;
Phổ kích thích: bước sóng phát xạ cố định, bước sóng kích thích quét;
Phân tích định lượng: Thiết lập bước sóng kích thích/phát xạ cố định để đo cường độ huỳnh quang.
Đặt chiều rộng khe (ảnh hưởng đến độ phân giải và độ nhạy), thời gian tích hợp, tốc độ quét và các thông số khác, cân bằng tỷ lệ tín hiệu tiếng ồn với hiệu quả kiểm tra.
Bước 4: Background Correction và Baseline Scan
Đầu tiên đưa vào đĩa so sánh dung môi trống (ví dụ như nước khử ion, ethanol), thực hiện "khấu trừ nền" hoặc "hiệu chỉnh cơ bản", loại bỏ tán xạ Raman dung môi và tín hiệu cơ bản của thiết bị. Bước này đặc biệt quan trọng đối với các mẫu có cường độ huỳnh quang thấp.
Bước 5: Đo mẫu và thu thập dữ liệu
Thay thế bằng mẫu cần kiểm tra, bắt đầu quét. Quan sát đường cong phổ thời gian thực để xác nhận không có đỉnh hoặc tiếng ồn bất thường. Các mẫu quan trọng có thể được quét lặp lại để xác minh khả năng tái tạo. Để đo tuổi thọ huỳnh quang, bạn cần chuyển sang chế độ đếm photon đơn liên quan đến thời gian (TCSPC), sử dụng nguồn sáng xung và máy dò tốc độ cao.
Bước 6: Lưu dữ liệu và thiết lập lại thiết bị
Sau khi kiểm tra xong, lưu dữ liệu vào đường dẫn được chỉ định kịp thời, xuất sang định dạng chung (ví dụ:.csv,.txt). Lấy mẫu ra, rửa đĩa đo màu bằng dung môi và phơi khô. Tắt nguồn sáng (đặc biệt là đèn xenon, tránh chuyển đổi thường xuyên), máy chủ và phần mềm. Khi không sử dụng lâu dài, đậy nắp chống bụi.