Sắc ký lỏng có khả năng xử lý các hỗn hợp có thành phần phức tạp, sự khác biệt lớn về phân cực hoặc độ ổn định thấp. Bằng cách chọn giai đoạn cố định thích hợp và gradient pha chảy, nó có thể đạt được sự tách biệt hiệu quả của điểm sôi cao, đại phân tử, các chất không ổn định nhiệt như protein, polysaccharide, dư lượng thuốc trừ sâu và không cần nhiệt độ cao, tránh vấn đề phân hủy chất. Kết hợp một hệ thống lấy mẫu có độ chính xác cao và máy dò độ nhạy cao (như máy dò tia cực tím, máy dò huỳnh quang, máy dò phổ khối lượng, v.v.) có thể đáp ứng nhu cầu phát hiện dấu vết vật chất (nồng độ thấp như μg/L hoặc thậm chí ng/L cấp). Trong phân tích định tính, các thành phần của một chất có thể được xác định chính xác bằng cách giữ lại thời gian và xác minh kép của phổ đặc trưng hoặc khối phổ; Trong phân tích định lượng, các phương pháp trưởng thành như tiêu chuẩn bên ngoài và tiêu chuẩn bên trong có thể đạt được tính toán chính xác nồng độ chất.

Sắc ký lỏng sử dụng chất lỏng làm pha chảy, do sức đề kháng lớn khi chất lỏng chảy qua cột sắc ký, do đó cần áp dụng áp suất cao lên chất mang (thường lên tới 150~35.000KPa) để đảm bảo pha chảy có thể nhanh chóng đi qua cột sắc ký. Đồng thời, tốc độ dòng chảy của pha chảy trong cột cũng nhanh hơn nhiều so với sắc ký lỏng cổ điển (thường lên tới 1~10mL/phút), do đó rút ngắn đáng kể thời gian phân tích. Máy dò độ nhạy cao đã được sử dụng rộng rãi, tiếp tục cải thiện độ nhạy của phân tích. Ví dụ, độ nhạy của máy dò huỳnh quang có thể đạt đến mức 10g và mẫu nhỏ, thường chỉ cần một vài microliters.

So với sắc ký khí, sắc ký lỏng không bị giới hạn bởi tính dễ bay hơi của mẫu vật và có thể phân tích các chất hữu cơ có điểm sôi cao, độ ổn định nhiệt kém và trọng lượng phân tử tương đối lớn (trên 400). Những chất này chiếm gần 75 đến 80% tổng số cơ quan, về nguyên tắc có thể áp dụng sắc ký lỏng hiệu suất cao để phân tách và phân tích. Thường được trang bị hệ thống lấy mẫu tự động và phần mềm xử lý dữ liệu, làm cho quá trình vận hành dễ dàng và nhanh chóng hơn, giảm nguy cơ lỗi thủ công.

Các bước xác định sắc ký lỏng:

1. Tiền xử lý mẫu

- Chiết xuất: Lấy mẫu khoảng 10g (chính xác đến 0,1g) trong chai hình nón 100ml, thêm 60ml hỗn hợp chiết xuất và 2g natri clorua, dao động 30 phút. Được bơm bằng phễu lọc với lỗ lọc 80-120μm, dư lượng được rửa bằng chất chiết hỗn hợp 3 × 10ml. Kết hợp các bộ lọc và lotion trong cốc 250ml. Trong nước sôi đun nóng 30 phút, tháo ra, ly tâm ở 3000r/phút 20 phút, đặt trong tủ lạnh 4 ℃ để làm mát 20 phút, sau đó bơm qua phễu lọc với lỗ lọc 40~80 μm, thu thập chất lỏng lọc.

- Thanh lọc: Nếu thành phần mẫu phức tạp, các phương pháp như chiết pha rắn có thể được sử dụng để thanh lọc thêm.

- Dung tích cố định cô đặc: Máy thổi nitơ để chiết xuất được cô đặc đến gần khô, dung tích cố định bằng methanol đến thể tích thích hợp, sẽ được đo sau khi vượt qua màng lọc vi mô 0,22 μm.

2. Chuẩn bị dụng cụ

- Công thức pha dòng chảy: Chọn dung môi cấp HPLC trở lên, công thức pha dòng chảy theo tỷ lệ và lọc bằng màng lọc 0,22μm, nắp chai có lỗ thông hơi khi sử dụng.

- Cài đặt cột sắc ký: Cài đặt cột sắc ký chính xác trong hộp nhiệt độ cột, kết nối đường ống tốt để đảm bảo không bị rò rỉ.

- Cân bằng hệ thống: Rửa sạch hệ thống với pha dòng chảy trong ít nhất 30 phút cho đến khi đường cơ sở ổn định.

3. Phân tích mẫu

- Tải mẫu: Tiêm dung dịch mẫu vào vòng mẫu, chú ý tránh tạo bọt khí.

- Thu thập dữ liệu: Khởi động máy trạm sắc ký, bắt đầu thu thập dữ liệu, ghi lại sắc ký đồ.

4. Xử lý dữ liệu

- Định lượng định tính: Định lượng theo thời gian lưu giữ, sử dụng phương pháp đánh dấu bên ngoài hoặc phương pháp đánh dấu bên trong.

- Báo cáo kết quả: Tính toán hàm lượng hợp chất mục tiêu trong mẫu và đưa ra báo cáo thử nghiệm.