Nguyên tắc hoạt động cơ bản của sắc ký lỏng dựa trên sự khác biệt trong hệ số phân phối của các thành phần trong mẫu giữa pha cố định và pha chảy để đạt được sự tách biệt. Khi mẫu hỗn hợp được tiêm vào hệ thống sắc ký lỏng, nó sẽ đi vào cột sắc ký chứa các pha cố định (ví dụ: silica gel, pha liên kết hóa học, vật liệu hạt xốp như polymer) cùng với pha chảy (ví dụ: dung môi lỏng như nước, methanol, acetonitrile). Do sự khác biệt về lực tương tác giữa các thành phần khác nhau và pha cố định (ví dụ: hấp phụ, phân phối, lực cản trung chuyển, ái lực, v.v.), thời gian lưu giữ của chúng trong pha cố định cũng khác nhau. Cụ thể, những thành phần tương tác yếu với pha cố định, di chuyển nhanh hơn với pha chảy, sẽ chảy ra khỏi cột sắc ký đầu tiên; Còn thành phần kết hợp chặt chẽ với cố định, thì tốc độ di chuyển chậm hơn, sau đó chảy ra cột sắc ký. Thông qua quá trình này, các thành phần trong hỗn hợp có thể được tách ra từng cái một. Ngoài ra, hiệu ứng tách không chỉ phụ thuộc vào sự khác biệt về hệ số phân phối của chất tan trong hai pha (yếu tố nhiệt động lực học), mà còn bị ảnh hưởng bởi các yếu tố động học như hệ số khuếch tán, kích thước hạt cố định, tình trạng lấp đầy cột và tốc độ dòng chảy pha của dòng chảy.

Thận trọng khi sử dụng sắc ký lỏng:

1. Lựa chọn và xử lý giai đoạn dòng chảy

- Nên chọn dung môi cấp HPLC hoặc cao hơn, nước cần nước cất thứ cấp hoặc nước siêu tinh khiết và hiện có để sử dụng, ngăn ngừa vi sinh vật gây ô nhiễm hệ thống.

- Sau khi pha dòng chảy cần khôi phục lại nhiệt độ phòng để sử dụng lại, tránh chênh lệch nhiệt độ dẫn đến hiệu suất không ổn định.

- Khi sử dụng dung dịch muối đệm phải được lọc và rửa sạch dòng chảy bằng nước tinh khiết trước và sau khi sử dụng, không được để dung dịch muối đệm ở yên trong dòng chảy. Đồng thời, cột sắc ký cần được rửa sạch bằng pha hữu cơ tỷ lệ thấp (hàm lượng pha hữu cơ không thấp hơn 5), sau đó bảo quản pha hữu cơ tỷ lệ cao, tránh phân tích muối đệm. Cố gắng tránh nồng độ muối đệm phosphate cao (>10 mmol/L).

- Cố gắng tránh sử dụng acetonitrile tinh khiết làm pha chảy trong trường hợp trùng hợp acetonitrile gây ra sự mất hấp thụ chất lỏng. Khi không dùng được thì đề nghị sử dụng chai màu nâu để lưu trữ.

2. Đặc điểm kỹ thuật hoạt động

- Không tháo dỡ trong trạng thái áp suất tại kết nối đường cao áp.

- Thận trọng khi điều chỉnh tốc độ dòng chảy, tránh những thay đổi mạnh về áp suất và nhiệt độ, ngăn chặn các chất độn bên trong cột tác động.

- Việc thay đổi thành phần dung môi của dung dịch mẫu thử nghiệm nên được thực hiện từng bước, đặc biệt là trong sắc ký phản, không nên thay thế trực tiếp dung môi hữu cơ bằng nước tinh khiết hoặc ngược lại.

- Sau khi tắt nguồn đèn dò tia cực tím cần làm mát 30 phút trước khi tắt nguồn.

3. Bảo trì an toàn

- Chất thải cần được phân loại và thu gom, chất thải hữu cơ không được xả trực tiếp.

- Thường xuyên thực hiện bảo trì và bảo dưỡng dụng cụ, chẳng hạn như rửa kim lấy mẫu, thay thế miếng đệm kín, v.v.