(1) Nhu cầu dinh dưỡng

· Axit amin --- 12 axit amin phải (valine, leucine, isoleucine, threonine, lysine, tryptophan, phenylalanine, methionine, histidine, tyrosine, arginine, cysteine); 10 axit amin không thiết yếu; Ngoài ra còn cần glutamine, có vai trò quan trọng trong quá trình trao đổi chất của tế bào, nitơ chứa là nguồn tổng hợp purine và pyrimidine trong axit nucleic, cũng là chất cơ bản cần thiết để tổng hợp triple, bis và monophosphate glycoside.

• Hợp chất cacbon - đường - glucose; đường galactose; Các tế bào có khả năng hấp thụ glucose cao nhất và galactose thấp.

· Muối vô cơ ---- natri, kali, magiê, phốt pho, canxi, vv;

· Vitamin --- Biotin, Folate, Riboflavin, Vitamin C, Vitamin B12, Pyridoxine, v.v.;

· Protein và peptide --- albumin, ức chế peptidase, fetoglobulin, fibrin, transferrin, yếu tố tăng trưởng;

· Axit béo và chất béo ---- axit linoleic, axit oleic, cholesterol, v.v;

· Nguyên tố vi lượng ---- sắt, kẽm, selen, đồng, mangan, molypden, vanadi, v.v.

(2) Nhiệt độ

Nhiệt độ thường được sử dụng là 37 °, nhưng cần chú ý đến các tế bào mô có nguồn gốc sinh học khác nhau, nhiệt độ nuôi cấy thích hợp nhất là khác nhau, và các tế bào chịu được nhiệt độ thấp, không chịu được nhiệt độ cao. Trong phạm vi nhiệt độ sinh lý, nhiệt độ có liên quan tích cực đến tốc độ tăng trưởng của tế bào.

(3) Áp suất thẩm thấu

Kích thước của áp suất thẩm thấu được xác định chủ yếu bởi nồng độ của các thành phần muối khác nhau trong môi trường. Tế bào phải sống trong môi trường thẩm thấu với nguyên sinh thể của chính nó, nếu áp suất thẩm thấu của môi trường sống cao hơn chính nó, các tế bào nuôi cấy có thể phải đối mặt với mất nước và chết, nếu áp suất thẩm thấu của môi trường sống thấp hơn chính nó, các tế bào nuôi cấy có thể phải đối mặt với sự gia tăng hấp thụ và chết, nhưng hầu hết các tế bào nuôi cấy có khả năng chịu được áp suất thẩm thấu nhất định. Thẩm thấu huyết tương của con người 290mOsm/kg, có thể được coi là áp suất thẩm thấu lý tưởng để nuôi cấy tế bào của con người. Áp suất thẩm thấu tế bào chuột khoảng 320 mOsm/kg. Để nuôi cấy hầu hết các tế bào động vật có vú, áp suất thẩm thấu của môi trường kiểm soát là thích hợp trong khoảng 260-320mOsm/kg.

(4) pha khí

Môi trường pha khí nuôi cấy tế bào ngoài cơ thể thường được tạo thành từ 5% CO2 và 95% không khí. Trong đó O2 tham gia vào quá trình trao đổi chất năng lượng của tế bào. CO2 được sử dụng để duy trì độ axit và kiềm của chất lỏng nuôi cấy.

(5) pH

Môi trường thích hợp cho sự phát triển của hầu hết các tế bào có độ pH từ 7,0 đến 7,4 và môi trường pH 7,4 phù hợp với hầu hết các dòng tế bào động vật có vú. Màu đỏ phenol được sử dụng trong môi trường nuôi cấy như một chỉ số pH để liên tục theo dõi độ axit và kiềm của chất lỏng nuôi cấy, màu đỏ phenol làm cho chất lỏng nuôi cấy có màu vàng ở độ pH thấp và màu tím ở độ pH cao hơn và màu đỏ ở độ pH 7,2-7,4, thích hợp cho nuôi cấy tế bào.

(6) Không độc hại và không ô nhiễm

Không độc hại và vô trùng là điều kiện tiên quyết để nuôi cấy tế bào trong ống nghiệm. Trong hệ thống giải độc và hệ thống miễn dịch của tế bào sống có thể chống lại sự xâm nhập của vi sinh vật hoặc các chất có hại khác, nhưng trong nuôi cấy in vitro, tế bào thiếu sự bảo vệ của hệ thống miễn dịch của cơ thể do đó mất khả năng phòng thủ chống lại vi sinh vật và giải độc các chất có hại. Do đó, đảm bảo môi trường sinh trưởng của tế bào không độc hại và không ô nhiễm là điều kiện hàng đầu để nuôi dưỡng tế bào thành công. Trong quá trình nuôi cấy tế bào nhất định phải chú ý ngăn ngừa ô nhiễm hóa chất độc hại, ô nhiễm vi sinh vật, ô nhiễm chéo giữa các tế bào khác nhau.