2025năm9Tháng, đến từ nhiều cơ quan như Viện Nghiên cứu Y tế Đại học Kyoto, v. v.Naomi KitayamaNhóm nghiên cứu, trongTruyền thông nghiên cứu sinh hóa và sinh vật lýTạp chí có đề tài là“Nhắm mục tiêu PAR-2 trong viêm da đặc tính: Đánh giá tiền lâm sàng của chất ức chế mới E6795”Nghiên cứu. Bệnh Ung Thư: Video tổng hợp báo cáo tin tức dựa trên luật sử dụng hợp lý – Fair use for news reporting ((ADcơ chế bệnh lý, kích hoạt thụ thể protease mới2（PAR-2) Chất ức chế phân tử nhỏE6795Đánh giá tiền lâm sàng đã được thực hiện để tìm hiểu về sự cải thiện trongADTác dụng của các bệnh viêm, ngứa và rối loạn chức năng rào cản da.

Tóm tắt

mạc đường ruột muqueuses digestives (AD) Là một bệnh ngoài da viêm mãn tính, đặc trưng bởi tổn thương da giống như phát ban, ngứa dữ dội và chức năng rào cản da bị suy giảm. Mặc dù các phương pháp điều trị mới tiếp tục xuất hiện, nhiều bệnh nhân vẫn phải đối mặt với các vấn đề như kiểm soát bệnh không đầy đủ, chi phí điều trị cao và tái phát. Protease kích hoạt receptor2（PAR-2) TrongADBiểu hiện quá mức trong tổn thương da, phát huy tác dụng trong việc thúc đẩy phản ứng viêm, cảm giác ngứa ngáy và mất cân bằng trạng thái ổn định của da. Nghiên cứu này cung cấpE6795Bằng chứng nghiên cứu tiền lâm sàng rằng hợp chất này là một phân tử nhỏ được thiết kế đặc biệt để nhắm mục tiêu các quá trình bệnh lý nói trênPAR-2Thuốc ức chế. Phân tích kinase và dược lý xác nhận,E6795Ức chế chọn lọcPAR-2Tương tác lệch mục tiêu cực thấp đã được hiển thị trong một loạt các bảng kiểm tra kinase và dược lý. Hơn nữa,E6795Cải thiện ở cả hai mô hình chuộtADCác chỉ số kết thúc liên quan, bao gồm giảm phản ứng viêm và xâm nhập tế bào miễn dịch; mạc đường ruột muqueuses digestives (TEWL), và2%Các chế phẩm kem bôi tại chỗ cải thiện các biểu hiện mô học và các triệu chứng ngứa liên quan đến chức năng rào cản. Kiểm tra mô học xác nhận,E6795Giảm xâm nhập tế bào viêm sau khi điều trị và chức năng rào cản da được tăng cường. Kết quả nghiên cứu cho thấy,E6795bởi selective inhibitionPAR-2truyền tín hiệu, mục tiêu hoạt động trênADBa trụ cột của sinh lý bệnh——Rối loạn chức năng rào cản, phản ứng viêm và ngứa. Nghiên cứu này nhấn mạnhE6795Là một mô hình mới hiệu quả về chi phíADTiềm năng của thuốc điều trị tại chỗ.

Thử nghiệmVật liệu&dụng cụ

(I) Vật liệu thí nghiệm

1. Động vật thí nghiệm:11-12Con đực tuần tuổiNc / NgaChuột,6-14Châu nữ tuổiBALB / cChuột,6-10Con đực tuần tuổiC57BL / 6JChuột.

2. Thuốc thử và kháng thể:MK903、E6795、PAR-2Peptide kích thíchSLIGKV-NH8322ndle；vàSản phẩm SLIGRL-NH ₂, trypsin, thrombin, carboxymethylcellulose, dimethylsulfoxide, uratan, các kháng thể đánh dấu huỳnh quang khác nhau,FLIPRThuốc thử xét nghiệm canxi, collagenIIKiểu,DNase I、10%Formalin, Tô Mộc Tinh-Thuốc thử nhuộm màu Y Hồng, thuốc thử nhuộm màu xanh toluene, v. v.

3. Mẫu tế bào và mô: thận phôi ngườiHEK293Tế bào, mẫu da người khỏe mạnh,ADMẫu da bị tổn thương của bệnh nhân.

(ii) Dụng cụ thí nghiệm

Sản phẩm FDSS6000Hệ thống phát hiện huỳnh quang,FACS FortessaMáy tế bào lưu động,Chảy JoPhần mềm, đo độ dày, hệ thống đo vết xước,384Tấm lưu trữ thuốc thử polypropylene lỗ,TôiLoại túi collagen được làm bằng đáy trong suốt màu đen384Tấm lỗ, lồng thông gió, kính hiển vi và hệ thống phân tích hình ảnh,ASCHQuét hơiDụng cụ đo độ ẩm qua da

ASCH VAPOSCANDụng cụ đo độ ẩm qua da

Quy trình thử nghiệm

1. Thí nghiệm tế bào:HEK293tế bào chứa3%Huyết thanh bò.DMEMNuôi cấy trong môi trường nuôi cấy, tiêm chủng vào384Tải sau tấm lỗFLIPRThuốc thử Calcium, thêm nồng độ khác nhauE6795Tiền xử lý30phút, thêm trypsin hoặc thrombin, thông quaSản phẩm FDSS6000Giám sát hệ thống120cường độ huỳnh quang thời gian thực trong giây với bốn tham sốhậu cầnTính toán mô hìnhIC₅₀Giá trị.

2. Mô hình động vật Xây dựng&Quản trị:

￮MK903Cảm ứngADMô hình:BALB / cTai chuột liên tục8Ngày bôi địa phươngMK903Từ giây4Từ ngày đó, uống hàng ngày.E6795Chất lỏng hỗn hợp cacbon - methyl cellulose, nhóm đối chiếu cho môi giới tương ứng.

￮Nc / NgaNghiêm trọngADMô hình: Sẽ bị viêm daNc / NgaChuột được chia thành5Nhóm, bôi tại chỗ hàng ngàyE6795Kem, liên tục7Trời ạ, thiết lập nhóm chưa xử lý làm đối chiếu sinh học.

3. Đánh giá dược lực học:

Chức năng rào cản da: Vượt quaASCHQuét hơiDụng cụ đo độ ẩm qua daĐo số0、3、7Trời đất mất nướcgiá trị（TEWL）； Đo độ dày tai chuột hàng ngày bằng máy đo độ dày.

ASCH VAPOSCANDụng cụ đo độ ẩm qua da

（c）第3 Ngày và ngày7 mạc đường ruột muqueuses digestives (TEWL) Kết quả kiểm tra. So với nhóm đối chứng hòa tan,E6795Uống thuốc trong ngày7 Trời có thể giảm rõ rệt.TEWLB5-03=giá trị thông số Ki, (cài 3)8 Nhóm dùng Days Oraln = 3Ngoài ra, các nhóm còn lạin = 4）。* Sau khi sửaP < 0,05, so sánh với nhóm đối chứng hòa tan (Kiểm tra Dunnett)

￮Phát hiện hành vi ngứa: trong giây7trời17:00Đến ngày hôm sau07:00Đặt chuột một mình trong lồng đo.2Sau thời gian thích ứng hàng giờ, ghi lại bằng hệ thống đo vết trầy xước12Tần suất gãi gãi trong vòng một giờ.

￮Phân tích mô học&miễn dịch Mô da tai chuột được thu thập vào cuối thí nghiệm, được thực hiện sau khi cố định formaldehyde, sáp parafin5μmCắt lát, tiến hànhHãng H&ENhuộm (quan sát sự xâm nhập của tế bào viêm và độ dày của lớp biểu bì), nhuộm toluene xanh (đếm tế bào mast) vàPAR-2Nhiễm sắc miễn dịch; Các mẫu da người cũng được thực hiện tương tự.PAR-2Xét nghiệm miễn dịch.

￮Phân tích tế bào dòng chảy: mô da tai chuột được điều chế bằng enzyme để chuẩn bị đình chỉ đơn bào, sau khi nhuộm bằng kháng thể đánh dấu huỳnh quang, thông quaFACS FortessaKiểm tra bạch cầu ưa axit, bạch cầu trung tính,CD4⁺TSự xâm nhập của các tiểu quần thể tế bào miễn dịch như tế bào, bạch cầu ưa kiềm và kết quả được thể hiện bằng số lượng tế bào tuyệt đối trên mỗi milimét vuông da tai.

4. Nghiên cứu dược động học: phát hiện chuộtE6795Phân số tự do huyết tương, phân số tự do toàn phần và máu-Tỷ lệ plasma, đánh giá các đặc điểm hấp thụ và phân phối toàn thân của nó.

5. Phân tích chọn lọc: thông qua bảng chọn lọc kinase vàCEREPBảng điều khiển kết hợp dược lý, phát hiện1μMvà10μMDưới nồng độE6795Tác dụng ức chế trên nhiều loại kinase, thụ thể, kênh ion, đánh giá hoạt động không nhắm mục tiêu của chúng.

6. Phân tích thống kê: Sử dụngGraphPad Prism 7.03Thông số sản phẩm Thông tin sản phẩm Bình Luận(ANOVA một chiều) Kết hợpDunnettNhiều bài kiểm tra so sánh đểα = 0,05Để kiểm tra, dữ liệu được tính trung bình.±chuẩn cmnr (trung bình ± SEM) Biểu thị.

Kết luận thí nghiệm

1. E6795Mạnh mẽ và chọn lọcPAR-2ức chế hoạt động, trong đo lưu lượng canxi tế bàoIC₅₀Giá trị là6,56 nMPhải.PAR-1Không có tác dụng ức chế và hoạt động chống mục tiêu rất thấp trong một loạt các bảng điều khiển kinase và dược lý.

2. Hiển thị dược động họcE6795Uống có thể hấp thụ, mặc dù tỷ lệ kết hợp protein huyết tương cao97.5%Nhưng một lượng nhỏ thuốc tự do có thể phát huy tác dụng trị liệu.

3. Miễn dịch xác nhậnADBệnh nhân keratinocytePAR-2Biểu hiện cao hơn ở người khỏe mạnh.

4. ởMK903Cảm ứngADTrong mô hình chuột,E6795Cả uống và tại chỗ đều làm giảm sự xâm nhập bạch cầu ái toan, và uống có thể làm giảmTEWLCải thiện chức năng rào chắn da, cho thuốc cục bộ có thể giảm độ dày tai.

5. ởNc / Nga ADTrong mô hình chuột,2% E6795Kem có thể làm giảm độ dày của lớp biểu bì, thâm nhập tế bào mast và hành vi gãi, cải thiện biểu hiện mô học liên quan đến viêm da.

6. E6795bởi selective inhibitionPAR-2Tín hiệu, mục tiêu.ADBa lõi chính của sinh lý bệnh (viêm, ngứa, rối loạn chức năng rào cản), có tiềm năng hoạt động như một phương thuốc điều trị tại chỗ xâm lấn tối thiểu, hiệu quả về chi phí.