Chuẩn bị trước khi lên nồi
Chuẩn bị đình chỉ tế bào: Các tế bào nuôi cấy trước được thu thập từ lọ hoặc đĩa petri, sau khi trộn đều lấy 1 mL để đếm tế bào, đảm bảo mật độ tiêm chủng phù hợp.
2, khử trùng thiết bị: Kiểm tra thân xe tăng lò phản ứng, đường ống và điện cực đã được khử trùng (như xử lý hơi nước cao áp 121 ℃) để tránh ô nhiễm vi sinh vật.
Môi trường và chất đệm: Chuẩn bị đủ môi trường và điều chỉnh trước pH đến phạm vi mục tiêu (ví dụ: 7,2-7,4), làm mát dự phòng sau khi khử trùng.
2. tiêm chủng và nuôi cấy ban đầu
Hoạt động vô trùng: Trong tủ an toàn sinh học, việc đình chỉ tế bào được chuyển qua một đường ống vô trùng vào lò phản ứng trong khi đi qua hỗn hợp hỗ trợ khí nén.
2, Cài đặt tham số:
Nhiệt độ: Các tế bào động vật có vú thường được đặt ở 37 ° C.
Oxy hòa tan (DO) ban đầu được đặt ở mức 40%, ổn định bằng hỗn hợp khí (O₂/N₂/CO ₂).
Kiểm soát pH Sử dụng bơm nhu động để bổ sung axit/kiềm hoặc thông qua điều chỉnh CO ₂, giữ pH ở mức 6,5-7,0 (điều chỉnh theo loại tế bào).
III. Giám sát quá trình nuôi trồng
Lấy mẫu định kỳ: Lấy mẫu trực tuyến mỗi 24 giờ để phát hiện mật độ tế bào, pH và nồng độ chất chuyển hóa (như glucose, axit lactic).
2, Flow bổ sung: Tùy thuộc vào mức tiêu thụ dinh dưỡng, Flow tập trung môi trường hoặc các thành phần cụ thể (như axit amin), kéo dài thời gian phát triển logarit tế bào.
Kiểm soát lực cắt: Sử dụng khuấy tốc độ quay thấp (như 50-100 vòng/phút) hoặc lò phản ứng loại sóng để tránh thiệt hại cơ học.
IV. Thu hoạch và làm sạch
Chấm dứt nuôi cấy: Tắt hệ thống điều khiển tự động khi tế bào đi vào giai đoạn phân hủy hoặc khi tích lũy sản phẩm đạt đỉnh.
2, Xả và thu gom: Chất lỏng nuôi cấy được thải vào thùng chất thải bằng khí nén, tách tế bào khỏi chất lỏng thượng lưu.
3, rửa và khử trùng: rửa bể và các thành phần bằng nước tinh khiết, ngâm natri hydroxit 0.1M qua đêm để đảm bảo không có dư lượng.
V. Chú ý
Hoạt động vô trùng: Toàn bộ quá trình cần tránh ô nhiễm nghiêm ngặt, khử trùng găng tay và dụng cụ trước khi vận hành.
2, hiệu chuẩn thông số: kiểm tra pH, điện cực oxy hòa tan thường xuyên để đảm bảo dữ liệu chính xác.
Mở rộng sản xuất: Hoạt động hàng loạt có thể được mở rộng trực tiếp đến quy mô công nghiệp (chẳng hạn như 12000L), nhưng cần tối ưu hóa hiệu quả khuấy và truyền khối lượng.
Thông qua các bước trên, có thể hoàn thành hiệu quả hoạt động của lò phản ứng sinh học nuôi cấy tế bào, thích hợp cho việc sản xuất kháng thể đơn dòng, vắc-xin và các sản phẩm sinh học khác.